「2023衡中同卷分科综合理综 答案」衡中同卷理科综合一

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25.(11分)(1)SalI(1分)EcoR I(1分)6(2分)(2)F7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达(2分)》(3)引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上(2分)根据有无荧光情况判断，F1~F4与R扩增产物上均有结合位点，因此结合位点位于F4所对应调控序列的下游（右侧）：F5~F6与R扩增产物上均无结合位点，可知结合位点位于F5所对应调控序列的上游（左侧），所以结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上(3分)》【考查点】本题考查PCR技术、基因表达载体的构建和双酶切法的应用。【解析】(1)据题意可知，需要将扩增后的产物定向插入并指导荧光蛋白基因的表达，则扩增后的产物读取方向与荧光蛋白基因的读取方向一致，故扩增后的产物中的R端与荧光蛋白基因中限制酶MuI识别序列端结合，才能保证扩增后的产物定向插入载体并指导荧光蛋白基因的表达。要做到定向插入，需要在引物两端添加限制酶的识别序列，且被限制酶识别并切割后，两端的黏性末端不能相同。而扩增后的产物中可能含有MunI和XoI的识别位点，故在引物末端添加限制酶的识别序列不能被限制酶MunI和XhoI识别，故应该选用添加限制酶EcoR I和限制酶SalI识别序列，据图中对限制酶的注释可知，限制酶MunI识别并切割后的黏性末端与限制酶EcoR I识别并切割后的黏性末端相同，限制酶XhoI识别并切割后的黏性末端与限制酶SalI识别并切割后的黏性末端相同，故R末端添加的序列所对应的限制酶是EcoR I,在F1~F7末端添加的序列所对应的限制酶是SalI;荧光蛋白基因中含有限制酶EcoR I的识别位点，故对载体使用限制酶MunI和XhoI切割。综上所述，对载体使用限制酶MunI和XhoI切割，对扩增后的产物用限制酶EcoR I和限制酶SalI切割，然后在DNA连接酶的催化作用下，连接形成重组载体；产物扩增中需要使用Tq酶催化，合成更多的产物，故从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要6种酶，分别是Taq酶、限制酶EcoR I、限制酶SalI、限制酶MunI、限制酶XhoI和DNA连接酶。(2)受体细胞中已经除去BCL11A基因，即受体细胞无法表达出BCL11A蛋白，故扩增产物中的BCL11A蛋白结合位点不能结合BCL11A蛋白，则不会抑制荧光蛋白基因的表达；基因的表达需要RNA聚合酶与启动子结合，才能完成荧光蛋白基因的转录过程；含F1~F6与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F7与R扩增产物的受体细胞无荧光，则可能是7与R扩增产物不含完整的启动子，荧光蛋白基因不表达。(3)向培养液中添加适量的雌激素，此时重组载体上的BCL11A基因表达，产生BCL11A蛋白，BCL11A蛋白与BCL11A蛋白结合位点结合后，导致荧光蛋白基因被抑制；含F1~F4与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，则说明BCL11A蛋白结合位点在引物4与引物R之间的序列上；含F5~F6与R扩增产物的受体细胞仍有荧光，则说明BCL11A蛋白结合位点在引物F5的上游序列，故据此结果可推测，BCL11A蛋白结合位点位于引物F4与F5在调控序列上所对应序列之间的区段上。

13.A【考查点】本题考查DNA粗提取的原理。【解析】木瓜蛋白酶可以水解DNA中的蛋白质类杂质，由于酶具有专一性，木瓜蛋白酶不能水解DNA,因此，加入适量木瓜蛋白酶处理并过滤后，在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出DNA相对含量较高的白色丝状物，A正确；37~40℃的水浴箱中保温10~15分钟不能去除滤液中的杂质，应该放在60~75℃的水浴箱中保温10~15分钟，使蛋白质变性析出，B错误；加入与滤液体积相等的、体积分数为95%的冷却的酒精，此时DNA析出，不会进人滤液中，C错误：加入NaCl调节浓度至2mol/L→过滤→调节滤液中NaCl浓度至0.14mo/L,DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，DNA析出，不会进入滤液中，D错误。教材溯源本题考查DNA的粗提取，其来自教材“探究·实践”栏目。详见[人教版选择性必修三P74]